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當前位置:首頁技術文章熱銷產品:polyplus轉染試劑INTERFERin®

熱銷產品:polyplus轉染試劑INTERFERin®

更新時間:2023-06-30點擊次數:1336

polyplus轉染試劑INTERFERin®在1nM siRNA下已經提供了非常高的沉默效率,并且可以用于多種粘附細胞和懸浮細胞。使用低濃度的siRNA可以避免脫靶效應,其溫和的作用模式確保了更可靠的數據和優異的細胞活力。由于與血清和抗生素的兼容性,INTERFERin®易于使用,也非常適合轉染miRNA和其他寡核苷酸,如pre-miRNA、mimic miRNA等。

產品優勢:

一、更少的siRNA,更少的脫靶效應

一些出版物表明,轉染低濃度的siRNA可以避免脫靶效應。事實上,當以高濃度轉染siRNA時,可以觀察到這些不想要的非特異

性副作用。因此,可以通過使用盡可能少的siRNA來提高實驗數據的可靠性。這就是為什么INTERFERin®被專門設計為使用

低siRNA濃度提供高沉默效率的原因。

INTERFERin®介導的1 nM特異性siRNA的遞送顯示出對基因表達的選擇性和高效敲低,而競爭對手(L2K)至少需要

10 nM siRNA才能達到50%的沉默效率(圖1)。

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圖1:INTERFERin®只需要1 nM siRNA即可實現有效的基因沉默。根據制造商的建議,使用INTERFERin®或競爭對手L2K用抗-Luc siRNA轉染穩定表達螢火蟲螢光素酶的3LL細胞。48小時后使用常規測定法測量螢光素酶的表達。對照siRNA未觀察到抑制作用。

令人驚訝的是,在10pM的siRNA下仍然實現了50%的沉默(圖2)。

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圖2:即使在極低的siRNA濃度下,INTERFERin®也是高效的。A549-GL3Luc細胞在血清存在下使用INTERFERin®轉染,并降低抗-Luc siRNA的濃度。48小時后使用常規測定法測量螢光素酶的表達。對照siRNA未觀察到抑制作用。

用INTERFERin®轉染靶向內源性層粘連蛋白A/C的1nM siRNA可將層粘連蛋白基因表達顯著降低至幾乎無法檢測的水平(圖3)。

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圖3:用INTERFERin®轉染1nM siRNA導致有效和特異的基因沉默。使用INTERFERin®用1nM層粘連蛋白A/C siRNA轉染CaSki細胞。48小時后,通過免疫熒光顯微鏡測定層粘連蛋白A/C沉默效率。

二、適用于miRNA轉染microRNA(miRNA)寡核苷酸的轉染越來越多地被用于分析特定miRNA對細胞功能的生物學影響。INTERFERin®是遞送

miRNA、miRNA模擬物或前miRNA的首xuan試劑。

INTERFERin®是最新一代siRNA和miRNA轉染試劑,特別設計用于在多種細胞中實現高轉染效率,從而實現高基因沉默或刺激

基因表達。事實上,一些miRNA也已知通過與感興趣基因的啟動子結合來誘導基因表達。例如,INTERFERin®介導的miR-373

的遞送導致E-鈣粘蛋白表達增加3倍(圖4)。

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圖4:用INTERFERin®轉染miR-373增強E-鈣粘蛋白的表達。將PC-3細胞接種在6孔板中,并用miR-373(25 nM)轉染,每孔使用8µl的INTERFERin®。轉染后72小時,通過RT-qPCR測定E-鈣粘蛋白mRNA的表達水平。用HPRT-1基因表達對測定進行標準化。

INTERFERin®的陽離子組分只需要很少的寡核苷酸量,從而實現溫和的轉染過程。此外,簡單而穩健的協議確保了可重復的結果。像miRNA這樣的寡核苷酸可以用少量的INTERFERin®轉染,從而導致強烈的基因沉默或刺激基因表達。無論使用何種濃度的INTERFERin®,效果都大致相同,使INTERFERin®成為一種經濟的試劑。例如,使用不同體積的INTERFERin®的折疊變化始終在1.5和1.8之間(圖5)。

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圖5:INTERFERin®在非常低的量下已經很有效。將PC-3細胞接種在6孔板中,并使用4、6或8µl/孔的INTERFERin®用miR-373(10nM)轉染。轉染后72小時,通過Western印跡分析E-鈣粘蛋白的表達。使用β-肌動蛋白表達對測定進行標準化。以對照情況為參考來表示量化。

與高細胞活力相關的高轉染效率使INTERFERin®成為為科學出版物生成相關數據的首xuan試劑。事實上,自推出以來,使用INTERFERin®研究miRNA和miRNA相關分子的出版物數量呈指數級增長(圖6)。

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圖6:INTERFERin®參與了越來越多關于miRNA轉染的出版物。

三、超過90%的基因沉默

對于許多貼壁細胞系或原代細胞,1nM的siRNA足以獲得90%以上的基因沉默。對于懸浮細胞系,使用5nM siRNA的INTERFERin®仍然可以達到80%的沉默(表1)。

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表1:用INTERFERin®成功轉染的細胞系和獲得的沉默效率。

四、卓yue的細胞活力

在細胞活力方面,INTERFERin®優于其他轉染試劑。用1nM siRNA轉染48小時后,用INTERFERin®轉染的細胞看起來是健康的,而用試劑可以清楚地觀察到毒性(圖7)。

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圖7:INTERFERin®對細胞極為溫和,如使用INTERFERin®或競爭試劑轉染siRNA 48小時后細胞形態的比較所示。A549-GL3Luc細胞在血清存在下,使用INTERFERin®或競爭對手S或H,根據制造商的方案,用1nM螢光素酶siRNA轉染。

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